期刊简介
1953年8月创刊，中华医学会主办。本刊是我国口腔医学界公认的代表国家水平的学术刊物，具有较高的学术影响和权威性。读者为广大口腔医师。本刊有由国内著名权威专家撰写的“述评”、“专论”、“回顾与进展”、“专家笔谈”；有中华口腔医学会各专业委员会拟订的“诊疗指南”；有具有学术导向性的“会议纪要”；有规范临床操作的各种系列“讲座”等，还有按专业分栏目的论著。本刊是中国生物医学核心期刊，被美国《医学索引》、荷兰《医学文摘》、美国《化学文摘》、俄罗斯文摘等10余个著名国际检索期刊和数据库收录。本刊一直保持着国家新闻出版署授予的“中国期刊方阵”（双效期刊）的荣誉称号；连续9次获得“百种中国杰出学术期刊”奖；连续3年获中国科协科技期刊精品工程项目资助。
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首页>中华口腔医学杂志
- 杂志名称：中华口腔医学杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：1002-0098
- 国内刊号：11-2144/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：中国科协优秀科技期刊评比二等奖（1996）期刊收录：知网收录(中), 维普收录(中), 万方收录(中), 国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日)
口腔癌细胞HSV-tk基因的转导及其鉴定
孙春晓；何荣根；张志愿；陈诗书
关键词：口腔颌面外科, 癌细胞, 人类基因, 逆转录病毒载体, 医科大学, 细胞培养上清液, 肿瘤细胞, 治疗中心, 引物, 克隆, 基因转导, 基因治疗, thymidine kinase, 人舌鳞状细胞癌, 脂质体, 胸苷激酶基因, 细胞系, 外源基因整合, 外源基因表达, 上海
摘要：单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase, HSV-tk)是自杀基因的代表。我们将HSV-tk基因转导入口腔癌细胞系Tca8113和ACC-M细胞并对基因转导细胞进行鉴定，以便为体内外及临床前期试验打下基础。 材料与方法:①人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113和人高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株ACC-M由上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科建立［1,2］。逆转录病毒包装细胞PA317细胞、NIH3T3细胞由上海第二医科大学人类基因治疗中心保存。含HSV-tk基因的逆转录病毒载体pL(TK)SN由上海第二医科大学人类基因治疗中心构建。②脂质体介导基因转移: PA317细胞中加入DNA与脂质体混合物1 ml，6 h后，以400 mg/L G418筛选至克隆出现并扩增，命名为PA317TK细胞和PA317LN细胞。③逆转录病毒载体上清液的收集及滴度测定: 收集PA317TK和PA317LN细胞培养上清液。NIH3T3细胞中加入8 mg/L的polybrene和适量病毒悬液，8 h后以G418筛选至克隆出现。根据克隆形成数计算病毒滴度。④肿瘤细胞tk基因的转导：肿瘤细胞中加入polybrene和适量病毒上清液，24 h后，以G418筛选至克隆出现并扩增。⑤PCR鉴定外源基因整合: 细胞总DNA进行PCR：NeoR基因5′端引物为5′-CAAGATGGATTGCACGCAGG-3′，3′端引物为5′-CCCGCTCAGAAAGAACTCGTC-3′。⑥RT-PCR检测外源基因表达 TRIzol RNA抽提试剂盒抽提细胞RNA并进行RT-PCR，产物做PCR，β-actin作内参照。⑦安全性检测: 1 μg细胞DNA进行PCR：env基因5′端引物为5′-ACCTGGAGAGTCACCAACC-3′，3′端引物为5′-TACTTTGGAGAG GTCGTAGC-3′。
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